Рекомбинантните протеински антигени често имаат неколку различни епитопи, од кои некои се епитопи со низа, а некои се структурни епитопи.Поликлоналните антитела добиени со имунизација на животни со денатурирани антигени се мешавини на антитела специфични за поединечни епитопи и може да се користат општо за откривање на природни структури или денатурирани целни протеини.Несакана придобивка од користењето на денатурираните протеини како имуногени е тоа што денатурираните протеини имаат тенденција да бидат поимуногени и можат да стимулираат силен имунолошки одговор кај животните.
Системот на изразување на Escherichia coli обично се избира за антигенски цели бидејќи е најскапиот систем во однос на време и пари.Со цел да се подобри можноста за изразување на целниот протеин и практичноста за прочистување, понекогаш се изразува само мал фрагмент од целниот протеин, како што е специфичен домен.
Тридимензионалната структура на протеините
Специфичен домен на протеин
Ако целта на подготовката на антителата е единствено за откривање wb, економично и брзо е да се користи синтетички мал пептид како антиген, но постои ризик од слаба имуногеност или нерегеничност поради несоодветен избор на пептидниот сегмент.Бидејќи подготовката на антителата бара долг период, често се избираат два или три различни пептидни сегменти за да се подготват антитела користејќи полипептиден антиген за да се обезбеди стапка на успех на експериментот.
Чистотата на полипептидниот антиген за имунизација е потребно да биде поголема од 80%.Иако со поголема чистота теоретски може да се добијат антитела со подобра специфичност, во пракса, животните секогаш произведуваат голем број на неспецифични антитела, со што се маскираат придобивките од чистотата на антигенот.
Дополнително, подготовката на антитела од мали пептиди мора да биде вкрстено поврзана со соодветниот антиген-носител за да се подобри неговата имуногеност.Два вообичаени антигенски носители се KLH и BSA.
Време на објавување: Мар-23-2023